目前PCR實驗室建設(shè)要求至少應該分為三個區(qū)域,即試劑準備區(qū)、核酸制備區(qū)和PCR擴增區(qū)。如果要對擴增產(chǎn)物進行開放性鑒定,如雜交、電泳等操作,原則上需要增加第四個區(qū)。實驗室分區(qū)的主要目的是避免純化核酸和擴增產(chǎn)物逆向污染前一個區(qū)域。但多年的經(jīng)驗表明,無論是三區(qū)還是四區(qū)的設(shè)置,似乎都沒有完全杜絕實驗室污染的發(fā)生。那么PCR實驗室究競應如何建設(shè)才能有利于污染的預防和有效清除?
其實污染就是PCR擴增管中摻入了原來樣本不存在的擴增核酸,那么這個不受歡迎的核酸是怎么來到PCR擴增管里的?如果排除試劑盒、儀器和人員操作等環(huán)節(jié),核酸氣溶膠和灑落的樣本與核酸的清除是實驗室建設(shè)應該重點考慮的環(huán)節(jié)。
實驗室的建設(shè)首先要有通風設(shè)置,通風是PCR實驗室建設(shè)應該考慮的基本條件,如果采用封閉彩鋼板建設(shè)的實驗室,應進行壓差設(shè)置，即自試劑準備室、核酸制備室到擴增室依次呈負壓,但清潔新風應從室外引進,新風過濾網(wǎng)應定期更換,否則便會成為污染的來源。其次是實驗室墻面和地面具有防水功能,也就是墻面和地面可以水洗。每個房間設(shè)置地漏,方便“實驗室的清潔”， 當實驗室污染發(fā)生時,即可使用“水洗實驗室”的方法有效清除污染,清除過程使用的是0.29%有效氨溶液,它不但有效斷裂核酸片段,而且還具有淬滅熒光基團,有利于PCR實驗室熒光本底的去除。但過量使用反而會影響試劑擴增效率。消毒液清洗后應該使用自來水或清潔水進行再次清洗,特別是設(shè)備表面。實驗室空氣中的污染清除,可以用有效氨溶液進行噴霧。
總之，PCR實驗室過度分區(qū)和分割,不但浪費空間,影響人員操作,常常不利于污染物的擴散和清除。相信在不久的將來,隨著試劑盒技術(shù)的發(fā)展,一個房間可實現(xiàn)PCR的試劑準備、核酸純化和PCR打增的所有功能，而污染的預防和清除也會顯得十分簡單。
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